Статьи и очерки | ||
Малые РНК в большой науке. Часть 1. Феномен малых РНК. 18.01.2003 |
||
Генрих Румсдорф, Аннотация: В 2002 году высшей оценки экспертов
влиятельного научного журнала "Science" ("Наука")
удостоились ученые, открывшие необычные свойства так
называемых "малых РНК". Эта заметка расскажет о том, как
работают малые РНК и какую пользу из этого открытия может
извлечь наука и медицина.
Помнится, в 80-х годах прошлого века у нас в городе не то
чтобы популярно, а просто принято было, считалось хорошим
тоном, особенно в рабоче-служащих кварталах, что на
периферии, иметь на каждом балконе цветы. В кадках, горшках
и горшочках, в длинных ящиках - цветниках, вьющиеся,
гвоздики, герани, анютины глазки, чахлые и не слишком,
согласитесь, кто застал то время, в этом было свое, пусть и
немного мещанское, очарование.
Потом город стал меняться, повзрослел. На смену
романтикам и провинциалам пришло наше прагматичное
поколение, и цветочные клумбы постепенно забылись, лишь
мертвыми букетами на цветочных базарах напоминая о попытке
построить если не город-сад, то хотя бы город-цветник.
А вот европейцы, похоже, от такой мечты не откажутся ни
за что. Они любят цветы. Они лелеют цветы. Они возвели
цветоводство и цветочный дизайн в ранг искусства.
Петуния - один из любимцев европейских селекционеров, за
века создавших потрясающее множество цветов, оттенков и форм
этого непременного, а нередко основного жителя городских
цветников. Современные селекционеры уже не полагаются только
лишь на причуды природы, а самостоятельно и направленно
изменяют живые организмы.
Задавшись целью получить сорт петуний, который обладал бы
более яркими бардовыми лепестками, генетики ввели в ее
клетки ген, отвечающий за синтез красного пигмента. К
удивлению ученых, многие цветы, вместо того, чтобы усилить
окраску, вовсе теряли пигмент и получались белыми.
С этого и других похожих наблюдений, сделанных в начале
90-х годов, и началась история малых РНК.
В другом эксперименте биологи, изучавшие генетическую
регуляцию у одного из самых популярных в последнее время
модельных организмов - червя
Caenorhabditis elegans (
Ценорабдитис элеганс , или
сокращенно C. elegans ),
пытались усилить работу определенных генов путем введения в
клетки червя дополнительных копий таких генов (в виде ДНК).
И снова, вместо усиления выраженности (экспрессии, о
которой ниже) данного гена, ученые наблюдали противоположный
эффект: его полное "замолкание".
Длительное время никто не мог объяснить происходившие
феномены, рассматривая их как артефакты. И лишь спустя годы
удалось установить, что во всех подобных случаях в клетках
подопытных организмов появлялись большие количества так
называемых "малых" РНК. К еще большему удивлению привело
исследование структуры таких молекул. Оказалось, что эти РНК
являются копией отдельных участков тех самых генов (ДНК),
которые вводились в клетку, и активность которых
подавлялась.
Снова - загадка. С одной стороны, структура таких
малых РНК однозначно говорит о том, что
они были скопированы с введенной в клетку ДНК, что для
клетки вполне нормально (если не считать подозрительно малую
длину этих молекул). С другой стороны - вместо того, чтобы,
как большинство "нормальных" информационных РНК, переносить
информацию для
синтеза белков и способствовать, таким образом, усилению
выраженности гена (например, усиливая цвет петуний), эти РНК
каким - то образом умудряются проделывать совершенно
противоположную работу.
Начиная с 1995 года, исследователи предприняли попытки
повторить этот эффект экспериментально. Для этого они
искусственно синтезировали небольшие участки РНК, являющиеся
почти точной копией участка определенного гена, и вводили их
различным организмам.
Первое подтверждение феномена "замолкания" генов было
получено все у того же C. elegans. Немного позже это
свойство коротких РНК выявили у мух и, наконец, в 2001 году
- при введении в клетки мыши и человека. В том же 2001 году
Science включил исследования малых РНК в число наиболее важных.
Почему же короткие РНК способны выполнять столь необычные
функции?
Решение парадокса малых РНК началось с детального
изучения их структуры, биологических характеристик и путей
их превращения ( метаболизма ) в
клетках различных организмов.
Длительное время биологи просто не обращали особого
внимания на короткие отрезки клеточной рибонуклеиновой
кислоты (РНК), полагая, что их роль в клетке не слишком
значительна. Гораздо больший интерес привлекали другие типы
РНК, а именно информационные и рибосомальные.
Оба этих класса - очень длинные молекулы, содержащие до 100
000 нуклеотидов. Первые (информационные, которые
часто называют также матричными РНК, или мРНК) переносят
генетическую информацию с хромосом (ДНК) в специальные
органеллы - "агрегаты" для синтеза белков -
рибосомы. Второй класс - рибосомальная РНК -
является одновременно и строительным материалом, и важнейшей
рабочей частью рибосом.
Понятно, что с первого взгляда малые
РНК, состоящие всего из нескольких десятков
нуклеотидов, могли показаться просто мусором, остатками от
своих "больших братьев". И даже несмотря на то, что роль
отдельных малых молекул РНК в процессах превращения
информационных РНК (сплайсинге), а также
при упаковке нитей нуклеиновых кислот, была доказана ранее,
истинным "хитом" в биологии малые РНК стали только лишь с
открытием своей способности подавлять экспрессию генов у
животных.
В нормально работающей клетке каждый ген выполняет
собственную, строго определенную функцию, например,
отвечает за выработку белка, мРНК, или за взаимодействие с
другими регуляторными белками. При этом говорят о
нормальной экспрессии (от лат. expressus -
выразительный, явный) гена в клетке. Если же количество
продукта данного гена (например, белка) снижается, то
говорят о снижении экспрессии данного гена. Эффект
"гашения" экспрессии определенных генов малыми РНК получил
название РНК - интерференции, а молекулы, вызывающие
его, назвали siRNA (small
interfering
RiboNucleic Acids
- малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты; мы решили
использовать для этих заметок англоязычное сокращение
термина, так как соответствующая русская аббревиатура пока
не является общепринятой - прим. автора).
С открытием siRNA - интерференции стало ясно, что этот
феномен может иметь огромное практическое значение.
Почему же именно малые РНК вызвали столь бурный всплеск
интереса? Ведь в распоряжении биологов имеется целый набор
других молекул и других методов, позволяющих заставить ген
"замолчать": от антисмысловых олигонуклеотидов,
рибозимов и химических блокаторов до возможности "выключить"
ген во всем организме путем внесения необходимой мутации в
зиготу (оплодотворенную яйцеклетку). Ответ на этот
вопрос мы найдем, познакомившись с их структурой и
свойствами более детально.
В класс малых РНК включают молекулы, содержащие от 20 до
300 нуклеотидов. За эффект РНК - интерференции отвечают
самые короткие из них - siRNA, состоящие всего из 21-28 (у
млекопитающих из 21-23) нуклеотидов. Особенностью этих
молекул является то, что они, в отличие от большинства
других клеточных РНК, состоящих всего из одной цепи
нуклеотидов, являются двунитчатыми. Нуклеотиды с
противоположных нитей (цепей) siRNA спариваются друг с
другом по тем же законам комплементарности, которые
формируют двунитчатые цепи ДНК в хромосомах. Кроме того, по
краям каждой из цепей siRNA всегда остается два неспаренных
нуклеотида (см. рисунок 1).
Структуру siRNA определили, выделив их из клетки. Но как
siRNA появляются в клетке, например, после введения
дополнительной копии гена, как это было в случае с петунией?
Очевидно, в клетке должен существовать некий молекулярный
механизм, который обеспечивал бы синтез siRNA, их накопление
в клетке и позволял бы им выключать гены. Исходя из этих
предположений, а также теоретически определив круг наиболее
вероятных участников процесса РНК - интерференции, ученые
приступили к поиску реальных компонентов, отвечающих за ее
исполнение. И хотя все детали этого процесса до сих пор
неизвестны, один из главных бастионов был взят: ученым
удалось выявить систему ферментов,
которая во многом схожа у всех многоклеточных и некоторых
одноклеточных организмов. Вот как она выглядит на схеме:
Если молекула siRNA по тем или иным причинам (например,
по воле исследователя) появляется в клетке, ее сразу же
"берет в оборот" специальная клеточная система белков, для
которых появление siRNA является сигналом к немедленному
действию.
На первом этапе с молекулой siRNA
связываются белки-ферменты хеликаза и
нуклеаза (см. этап 1 на рисунке), формируя комплекс
RISC (RNA-induced silencing
complex; silence - англ. молчать, замолкать;
silencing - замолкание, так в англоязычной и специальной
литературе называют процесс "выключения" гена). Хеликаза
раскручивает нити siRNA, в результате чего они расходятся
(этап 2). Одна из этих нитей, к которой прикреплен фермент
нуклеаза, может теперь связаться с комплементарным (строго
соответствующим ей) участком однонитчатой мРНК (этап 3),
позволяя нуклеазе разрезать ее. Разрезанные же участки мРНК
подвергаются действию других клеточных РНКаз, которые
до-разрезают их на более мелкие куски (этап 4).
Итак, основная "специальность" siRNA в клетке - это
блокирование тех генов, участок которых соответствует одной
из цепочек внутри siRNA. Но зачем механизм РНК -
интерференции существует в клетках? Какие процессы призван
регулировать? Что из себя представляют те мРНК, на которые
направлено жало малых РНК, и почему их необходимо
уничтожать?
Это - тема следующей части
рассказа о малых РНК.
|